Определение резуса фактора

Определение группы крови: цоликлоны, стандартные сыворотки и перекрестный способ

Определение резуса фактора

Определение группы крови и резус-фактора делятся на два способа:

Экспресс-диагностика (первичное определение группы крови и Rh-фактора) не учитывает антигены Келл, не говоря уже про другие системы верификации. Поэтому цоликлоны применяют только для первичного определения группы крови и резус-фактора и при экстренных показаниях трансфузии компонентов крови.

Подробнее о самой редкой группе крови в Мире можно найти здесь.

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D супер является наиболее современным и относительно простым методом. Для определения группы крови используются цоликлоны, т.е. моноклональные антитела.

Что требуется для определения группы крови и резус-фактора?

цоликлон анти-А;

цоликлон анти-В;

цоликлон анти-D;

– раствор натрия хлорида 0,9 %; специальный планшет; стерильные палочки.

Алгоритм и порядок определения группы крови

Нанести цоликлоны анти-А, анти-В на специальный планшет по одной большой капле (0,1 мл), под соответствующими надписями.

Рядом с ними капнуть исследуемую кровь (0,01–0,03 мл) по одной маленькой капле. Перемешать их и наблюдать за наступлением или отсутствием реакции агглютинации в течение 3 мин. При сомнительном результате добавить 1 каплю 0,9% физиологического раствора.

 Расшифровка результатов определения группы крови

  • если реакция агглютинации наступила с анти-А цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе А (II);
  • если реакция агглютинации наступила с анти-B цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе B (III);
  • если реакция агглютинации не наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе 0 (I);
  • если реакция агглютинации наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе AB (IV), как показано на рисунке.

AB (IV)

Определение резус-фактора цоликлоном Анти-D

На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D цоликлона и маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови пациента. За наступлением реакции агглютинации или её отсутствием наблюдают в течение 3 мин.

  • если реакция агглютинации наступила с цоликлоном анти-D , то исследуемая кровь относится к резус-положительной (Rh+)
  • если реакция агглютинации не наступила с цоликлоном анти-D, то исследуемая кровь относится к резус-отрицательной (Rh—)

AB (IV)Rh-

Другими словами, при смешивании цоликлона Анти-D с резус-положительными эритроцитами наступает реакция агглютинации, а если кровь резус-отрицательная — агглютинация отсутствует (как показано на рисунке — четвертая группа крови резус-отрицательная).

Определение групп крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками — поиск и обнаружение в крови антигенов А и В с помощью реакции агглютинации. Для достижения цели используют:

  • Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп крови О (I) — бесцветная, А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — жёлтая.
  • Белые тарелки, маркированные группами крови: 0 (I), А (II), В (III), AB (IV).
  • NaCl 0,9%
  • Стеклянные палочки
  1. Подписать тарелку (Ф.И.О. пациента);
  2. Нанести обозначения двух серий стандартных сывороток I, II и III групп крови в объёме 0,1 мл, образующие два ряда по три капли слева направо: 0 (I), А (II), В (III);
  3. Забрать кровь из вены. Шесть капель исследуемой крови пациента перенести стеклянной палочкой на пластину в шесть точек рядом с каплей стандартной сыворотки и перемешать.

Агглютинация начнется через 30 сек. В те капли, где произошла агглютинация, добавить по одной капле NaCl 0,9% и оценить результат.

Оценка результатов определение группы крови стандартными сыворотками

Положительная реакция агглютинации может быть пескообразной или лепестковой. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать.

Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками после наблюдения в течение 5 мин.

При этом следует отметить, что если сыворотки всех трёх групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к группе AB (IV).

Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB (IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0 (I), А (II) и В (III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ (IV).

Определение группы крови перекрестным способом — обнаружение наличия или отсутствия в исследуемой крови антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а также антител α и β с помощью стандартных эритроцитов. Реакцию со стандартными сыворотками проводят описанным выше способом.

Для реакции со стандартными эритроцитами необходимы стандартные эритроциты трёх групп крови: 0 (I), А (II), B (III).

Методика проведения реакции со стандартными эритроцитами

  1. Кровь для исследования берут из вены в пробирку, центрифугируют или оставляют на 30 мин для получения сыворотки.
  2. На маркированную тарелку наносят три больших капли (0,1 мл) сыворотки крови из пробирки, а рядом с ними по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп.
  3. Соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют NaCl 0,9% и оценивают результат.

Оценка результатов проведения реакции со стандартными эритроцитами

Оценивают результаты, полученные со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами. Особенность результатов реакции со стандартными эритроцитами — эритроциты группы 0 (I) считают контрольными.

Результат перекрёстного способа считают достоверным, если при  реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают.

Если этого не происходит, обе реакции следует переделать.

Источник: //anest-rean.ru/gruppa-krovi/opredelenie/

Определение в крови резус-фактора

Определение резуса фактора

Определение в крови резус-фактора производится врачами, прошед­шими специальную подготовку на СПК и получившими сертификат.

Резус-фактор определяется с помощью стандартной сыворотки, в ко­торой содержатся активные резус-антитела. Эта сыворотка готовится из крови лиц, сенсибилизированных к резус-фактору, это:

• резус-отрицательные женщины, сенсибилизированные к резус-фактору резус-положительным плодом во время беременности;

• доноры, у которых в крови обнаружены резус-антитела;

• лица, специально иммунизированные резус-антигеном;

• лица, перенесшие трансфузионные реакции или осложнения в связи с резус-конфликтом, в крови которых могут содержаться активные резус- антитела.

Готовая антирезусная сыворотка выпускается в ампулах или флако­нах по 2-5 мл с наклеенными этикетками, на которых указано учреждение – изготовитель, номер серии, обозначена группа по системе AB0, специфич­ность, форма резус-антител и срок годности. На этикетках, по диагонали, наносят те же цветные полосы, что и на стандартных гемагглютинирующих сыворотках.

Сывороткой антирезус 0(I) группы определяют резус-фактор только в эритроцитах первой группы, сывороткой антирезус А(II) группы – в эритроцитах первой и второй групп, а сывороткой антирезус В (III) группы в эритроцитах первой и третьей группах крови. Сывороткой антирезус группы АВ(IV), специально приготовленной (универсальной), определяют резус-фактор в эритроцитах группы АВ(IV) и в других группах крови по системе AB0.

При каждом исследовании на резусную принадлежность необходимо ставить контроль для проверки специфичности и активности сыворотки антирезус. Для контроля применяют стандартные резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты первой или той же группы, что и иссле­дуемая кровь.

Кровь для исследования берут, в количестве 5 мл, в обычную про­бирку без стабилизатора. На пробирке надписывают фамилию, инициалы, группу крови лица, у которого взята кровь, отделение и дату.

После свер­тывания крови на дне образуется сгусток из эритроцитов, которые и следу­ет брать для исследования.

Если этих эритроцитов недостаточно, следует встряхнуть сгусток для отделения большего их количества.

Можно брать кровь с изотоническим раствором лимоннокислого на­трия (0,25 мл на 1 мл крови), но в этом случае необходимо отмыть эритро­циты. Для этого в пробирку доверху наливают изотонический раствор хло­ристого натрия, хорошо перемешивают и центрифугируют. Отмытые эрит­роциты берут для исследования.

Стандартные антирезусные сыворотки активны только в определен­ных условиях, поэтому методика определения резус-фактора этими сыво­ротками указывается в сопроводительной инструкции. Резус-фактор в крови можно определять следую­щими способами:

• с помощью универсального реагента в пробирках без подогрева;

• реакцией с применением 10% желатина в пробирках с подогревом (+46- 48°С);

• реакцией агглютинации в солевой среде;

• с помощью цоликлона анти-Д Супер.

На практике чаще пользуются первым способом. Стандартный уни­версальный реагент представляет собой смесь сыворотки АВ(IV) группы крови и 33% раствора полиглюкина в соотношении 2:1. Его приготавлива­ют на СПК.

Универсальный реагент не содержит групповых агглютининов (в сыворотке АВ(IV) группы крови их нет), поэтому он может быть ис­пользован для определения резус-антигена Д в эритроцитах любой группы крови системы AB0.

Исследованию может подвергаться кровь, взятая из пальца, консервированная кровь и осадок эритроцитов в пробирке с кро­вью, взятой без стабилизатора, но после образования сгустка.

Методика проведения реакции:

1. В штатив устанавливают два ряда центрифужных пробирок объе­мом до 10 мл, по количеству образцов эритроцитов. Дополнительно уста­навливают еще две пробирки, для контроля реакции с резус- положительными и резус-отрицательными эритроцитами. Попарно, из первого и второго ряда пробирок, производят надписи фамилии и инициа­лов лиц, у которых исследуют кровь.

2. Во все пробирки первого ряда и в две контрольные пробирки вно­сят по две капли стандартного универсального реагента-антирезус; во все пробирки второго ряда вносят по две капли изотонического раствора хло­ристого натрия и по одной капле 33% раствора полиглюкина;

3. В пробирки первого и второго ряда вносят по одной капле иссле­дуемых эритроцитов; в первую контрольную пробирку вносят одну каплю стандартных резус-положительных эритроцитов, во вторую контрольную пробирку – такую же каплю стандартных резус-отрицательных эритроци­тов.

4. Пробирки встряхивают, затем медленно поворачивают по оси, на­клоняя почти до горизонтального уровня, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки, что делает реакцию более выраженной.

Оценка результатов исследования:

Агглютинация может появиться уже на первой минуте, но ожидать необходимо три минуты, так как реакция может быть замедленной.

Через три минуты в пробирки наливают по 2-3 мл изотонического раствора хло­ристого натрия, перемешивают двух – трехкратным плавным переворачи­ванием пробирок (не встряхивать!).

Пробирки просматривают на свет не­вооруженным глазом или через лупу, выявляя наличие или отсутствие агг­лютинации эритроцитов. Образцы эритроцитов, давшие агглютинацию с сывороткой антирезус, считаются резус-положительными, а не давшие агг­лютинации – резус-отрицательными.

В контрольных пробирках должна произойти аналогичная реакция – отсутствие агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритро­цитами и наличие ее со стандартными резус-положительными эритроци­тами. В пробирках второго ряда агглютинации быть не должно. Наличие агглютинации указывает на возможность ее появления за счет аутоантител.

В таких случаях следует повторить реакцию с эритроцитами, отмытыми в теплом изотоническом растворе хлористого натрия, для удаления с них ау­тоантител.

При сомнительном результате определения резус- принадлежности, следует применить метод агглютинации в солевой среде с использованием сыворотки антирезус, содержащей полные антитела, или провести исследование с цоликлонами анти-Д Супер.

Определение резус-принадлежности крови только по сыворотке анти-Д считается недостаточным. В случаях резус-отрицательной реакции необходимо дополнительное исследование сыворотками, содержащими антитела анти-С и анти-Е.

В число резус-отрицательных засчитываются только лица, кровь которых не содержит ни одного из этих антигенов.

Это особенно важно при обследовании доноров, беременных женщин с подоз­рением на изосенсибилизацию и некоторых других категорий больных.

Реакция агглютинации на плоскости

с помощью цоликлонов анти-D супер

1. Наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента на пластинку или планшет.

2. Наносят рядом маленькую каплю (0,02-0,03 мл) исследуемых эритроцитов. Тщательно смешивают реагент с эритроцитами стеклянной палочкой.

3. Через 10-20 секунд мягко покачивают пластинку.

4. Результаты реакции учитывают через 3 минуты после смешивания, несмотря на то, что четкая агглютинация наступает в первые 30 секунд.

5. При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус положительная, при отсутствии – как резус отрицательная.

6. Для определения резус-принадлежности ускоренным методом на плоскости при комнатной температуре могут быть использованы поликлональные сыворотки анти-D с неполными антителами, приготовленные в комбинации с коллоидами (альбумином, полиглюкином).

Цоликлон анти-D супер выпускается во флаконах по 2,5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). Срок хранения — 1 год в холо­дильнике при t 2~8 °С. Вскрытый флакон можно хранить в хо­лодильнике в течение месяца в закрытом виде.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Источник: //studopedia.ru/7_8552_opredelenie-v-krovi-rezus-faktora.html

Анализ на определение резус фактора и группы крови

Определение резуса фактора

Группа крови — это определенный набор антигенов и антител

Группа крови отражает наличие либо отсутствие определённого набора антигенов и антител. Располагаются антигены на поверхности форменных элементов крови — эритроцитах, антитела присутствуют в плазме крови.

Открытие характерных особенностей крови принадлежит Карлу Ландштейнеру. Австрийский врач в течение долгих лет пытался определить причину тяжёлых осложнений у некоторых пациентов после переливания крови.

Наконец ему удалось понять суть путём эксперимента: на примере 6 образцов крови учёный выявил физиологическую реакцию эритроцитов с различными сыворотками крови. Оказалось, что форменные элементы слипаются с антителами из сывороток других людей, происходит агглютинация.

Слипание образуется благодаря не самим эритроцитам, а антигенам, расположенным на них.

Благодаря Ландштейнеру медицина заговорила о группах крови

Антиген получил название агглютиноген, антитела к антигену — агглютинины. По принципу связывания агглютиногенов с определёнными агглютининами Ландштейнер выделил 3 группы крови.

Одна из них отличалась тем, что слипания эритроцитов при добавлении сыворотки в ней не происходило, то есть антигены в ней отсутствовали. За это она получила обозначение 0 (ноль), а две другие по наличию в них антигенов А и В. Таким образом в 1900 году была основана система групп крови АВ0.

Несколько лет спустя ученики Ландштейнера определили 4-ю группу крови, которая, в отличие от предыдущих групп, обладала сразу двумя антигенами — А и В.

На сегодняшний день существует 36 систем групп крови, но в медицинской практике наибольшее распространение и значение имеет по-прежнему система АВ0, а также резус-фактор, открытый позднее также при содействии Ландштейнера.

Какие существуют группы крови по системе АВ0

Группы крови по системе АВО

Система АВ0 насчитывает 4 группы крови:

  • 0 (I) — отсутствуют антигены;
  • А (II) — антиген А;
  • В (III) — антиген В;
  • АВ (IV) — антигены А и В.

Антиген — это олигосахаридная цепь, связанная с мембранными белками и липидами эритроцитов. Отличаются антигены А и В между собой только различным концевым остатком олигосахарида.

Предшественником антигенов А и В является антиген Н, присутствующий на всех эритроцитах. По наследству ребёнок получает от отца и матери гены, кодирующие молекулярное строение будущих антигенов.

Ген А кодирует фермент, образующий из части антигенов Н антиген А, ген В способствует формированию антигена В с помощью антигена Н.

В 0 (I) группе крови присутствует ген Н и соответственно антиген Н, но связываться ему не с чем, так как гены А и В отсутствуют.

В редких случаях встречается феномен Бомбей, когда на эритроцитах нет антигена Н. В этом случае определяется группа как 0 (I), так как А и В не определяются. Но таким людям можно переливать кровь только от доноров с таким же фенотипом, что представляет сложность, подобная особенность встречается менее чем у 1% людей на планете.

Краткие характеристики четырех групп крови

Несовместимость групп приводит к «слипанию» эритроцитов

В каждой из групп помимо антигенов присутствуют антитела. При соединении разных групп крови антитела начинают взаимодействовать с антигенами, слипаясь, они разрушают эритроциты, что приводит к тяжёлым последствиям, в том числе летальному исходу. Каждая группа крови отличается наличием антител к иным группам, исключение — AB.

  • Группа 0 характеризуется антителами α и β, то есть обладатели этой группы не могут принять кровь ни A, ни В, ни АВ.
  • Группа А содержит агглютинины β, что означает несовместимость с группой В и АВ, но принять кровь от группы 0 возможно.
  • Группа В отличается антителами α, не совместима с А и АВ группами, подходят доноры с группой 0.
  • Группа АВ не может иметь антител к данным антигенам, так как агглютиногены и агглютинины не могут сосуществовать в одном организме, поэтому обладателям АВ подходят все группы.

Таким образом, 0 группа может быть универсальным донором, АВ группа — универсальным реципиентом. Но в настоящее время отказались от практики переливания разных групп, трансфузия осуществляется от доноров той же группы крови во избежание негативных последствий.

Каждая из групп может быть подразделена на подгруппы, например, антиген А включает антигены А1, А2, А3 и т.д., антиген В также содержит различные варианты подгрупп. Обычно подгруппы могут иметь значение при определении группы крови. Перед трансфузиями, во избежание возможного влияния вариации подгрупп антигенов, проводят пробу на индивидуальную совместимость.

Резус-фактор: отрицательный и положительный

Группы крови могут иметь отрицательный или положительный резус

Наряду с АВ0 важным значением обладает система — резус (Rh).

Отличие групп по резусам выявлено в 40-х годах XX века, когда врачи столкнулись с агглютинацией сыворотки пациентки с 3⁄4 образцов эритроцитов от доноров, хотя с некоторыми образцами было полное совпадение групп крови по АВ0.

Позже под руководством К. Ландштейнера доктор А. Винер обнаружил и описал такую же реакцию, полученную при помощи сыворотки крови макаки-резус, откуда и произошло название.

Rh представляет собой белок из группы антигенов, находящихся на поверхности эритроцитов. Среди различных антигенов, составляющих систему резуса, преимущественное значение имеет антиген D. Поэтому именно его наличие определяет положительный резус (Rh +), его отсутствие означает, что фактор крови отрицательный (Rh -).

При попадании резус-положительных кровяных телец в кровеносную систему с резус-отрицательными эритроцитами образуются аллоиммунные антитела. Организм воспринимает антиген D как чужеродный и старается от него избавиться.

Такое явление называется резус-конфликт.

Открытие Rh-системы позволило избежать негативных последствий при трансфузии, а также найти способ помочь беременным, у которых возникает резус-конфликт с плодом при наличии разных резус-факторов.

Rh передаётся по наследству по рецессивно-доминантному типу, где (Rh -) является рецессивным, а (Rh +) доминантным.

Определение группы крови

Определение групповой принадлежности методом агглютинации

Группу крови выявляют при помощи реакции агглютинации. Эритроциты соединяют с солевым раствором моноклональных антител, каждый из которых содержит агглютинины α, β, α и β. По реакции склеивания с определёнными антителами выявляется соответственная группа.

Группа А — форменные элементы соединились с агглютининами α.

Группа В — склеивание произошло в растворе с антителами β.

Группа АВ — процесс агглютинации не наблюдался ни с одним из антител.

Группа 0 — эритроциты слиплись с антителами каждого раствора.

Определение резус-фактора

Определение резус-принадлежности крови

Для выявления резус-принадлежности используют различные методы, наиболее распространёнными являются тесты, основанные на взаимодействии эритроцитов с антирезусной сывороткой в различных растворах.

Контрольный образец обычно представляет собой антирезусную сыворотку IV группы крови, то есть не содержащую антиген D, антигены А и В.

Если происходит характерная реакция агглютинации, резус определяется как положительный.

Может ли исследование показать ложный результат

Нарушение техники процедуры может привести к ошибке теста

Тест может отразить искажённый результат в случаях:

  1. Нарушение техники выполнения анализа:
    • Некорректная температура.
    • Неверное соотношение агглютининов и эритроцитов.
    • Недостаточное время наблюдения.
    • Ошибка в порядке расположения реактивов на пластине.
    • Некачественные реагенты.
  2. Трудноопределимые группы крови и резус-фактор.
    • Если антиген на эритроцитах обладает низкой способностью к агглютинации, например, антиген А представлен подгруппой А2.
    • При неспецифическом слипании форменных элементов, что может быть следствием аутоиммунных патологий.
    • Искажению результата способствуют кровяные химеры. Это состояние, когда эритроциты представлены в нескольких популяциях, а антигены относятся к различным группам. Может произойти из-за массивных трансфузий от доноров 0 (I) группы, после трансплантации, но обычно наблюдается у гетерозиготных близнецов.
    • Различные заболевания влияют на агглютинационную способность эритроцитов.
    • Иногда у новорожденных агглютиногены проявлены слабо, антитела отсутствуют.

Может ли меняться группа крови?

Группа крови — тема, раскрытая наукой не до конца

Раньше на этот вопрос существовал однозначный ответ «нет». Если регистрировалась другая группа либо фактор, результаты списывались только на ошибку лаборатории. На сегодняшний день, когда оборудование и реактивы усовершенствованы, вероятность ошибки становится меньше.

Учёные заинтересовались данным вопросом и начали разрабатывать теории, которые меняют представление о дифференциации крови по группам. Одна из них получила широкое распространение: человеческий род изначально представляет собой совершенно различные виды, которые жили раньше отдельно, не смешиваясь друг с другом, у каждого вида был свой набор генов.

Когда люди начали перемещаться географически и создавать пары, кровь последующих поколений уже являлась смешанной, с метисным геномом. Иммунная система начала вырабатывать антитела против неизвестных ей антигенов. Так образовались группы крови.

Так как современные люди являются, по сути, метисами, у них присутствуют всевозможные комбинации антигенов, которые под воздействием различных факторов (инфекция, беременность) могут активизироваться, что проявляется в результате как смена группы крови.

На деле же метисный мультиген метисного генома просто проявляет свои иные «стороны», то есть изначально содержит разные антигены, которые в один период жизни проявляются одними антигенами, в иной — другими.

Интерес к происхождению групп крови не угасает. Недавно были выявлены 2 новые группы крови учёными из Вермонта, считается, что существует ещё минимум 10 групп, которые пока не удаётся познать.

Источник: //gidanaliz.ru/gruppa/rezus-faktora-gruppy-krovi.html

Как узнать резус-фактор крови?

Определение резуса фактора

Резус-фактор – один из параметров крови, который отражает присутствие или отсутствие на мембранах красных клеток особого белка Rh. В случае, если он есть, кровь резус-положительная и обозначается Rh+, при его отсутствии резус-отрицательной – Rh-.

Этот белок есть на эритроцитах большинства живущих на планете, но примерно у 15 % его нет. Его отсутствие или присутствие никак не сказывается на здоровье. Rh передается от родителей и на протяжении всей жизни остается неизменным.

Когда сдают анализ на Rh

Еще советуем:Резус-фактор и резус-конфликт

Определение резус-фактора происходит во время анализа крови на группу. Эта информация необходима при переливании, при подготовке к хирургическому вмешательству и в период вынашивания плода.

Во время беременности может произойти конфликт между кровью будущей матери и кровью ребенка. Зная о том, что женщина резус-отрицательная, врачи могут заранее предпринять меры, чтобы избежать конфликта и сохранить здоровье резус-положительного плода.

Сдать кровь на резус можно в лаборатории любой поликлиники или в стационаре. Для исследования делают забор из пальца или из вены.

Как определяют

Методов определения Rh несколько:

  • На чашках Петри методом конглютинации.
  • С помощью цоликлонов.
  • Экспресс-методом в пробирках без подогрева.
  • Желатиновым методом.

Суть анализа заключается в выявлении антигена D с помощью антирезусных сывороток или моноклональных реагентов (цоликлонов) в реакции агглютинации (склеивания эритроцитов и образования хлопьев) в пробирках или на плоскости.

Комплекс препаратов для определения Rh-принадлежности

На чашках Петри

Для определения резус-фактора понадобятся чашки Петри, индивидуальные пипетки, раствор натрия хлорида изотонический, сыворотки стандартные для всех групп крови. Порядок проведения:

  1. Капают рядом по две капли реагента двух серий для трех исследований (в три ряда).
  2. В каждую из серий добавляют по капле исследуемой крови и эритроцитов (контрольных положительных и контрольных отрицательных).
  3. Перемешивают, на десять минут ставят чашку на водяную баню (47°C).
  4. Результат определяют по наличию или отсутствию хлопьев (слипшихся эритроцитов). Если красные клетки склеились, Rh положительный, если слипания не произошло, Rh отрицательный.

Определение Rh-принадлежности цоликлонами

Чтобы узнать резус-фактор, применяют моноклональные реагенты – цоликлоны, которые получают методом генной инженерии из асцитной жидкости мышей. Rh определяется во время реакции агглютинации, которая происходит на плоскости.

Процедура должна проводиться в помещении с хорошим освещением. Для теста берут цельную кровь, эритроциты, находящиеся в сыворотке, плазме, физрастворе или консерванте, или отмытые эритроциты. Для получения лучшего результата нужны эритроциты высокой концентрации, а пластинка, на которой будет происходить реакция, подогревается до 37°C.

Алгоритм действий:

  1. На планшет индивидуальной пипеткой капают большую каплю реагента (примерное количество – 0,1 мл).
  2. Около реагента капают исследуемую кровь (маленькую каплю) или эритроциты в количестве 0,01 мл.
  3. С помощью стеклянной палочки как следует смешивают реагент и кровь и каждые 30 секунд тарелку покачивают в течение трех минут, наблюдая за реакцией визуально.
  4. Реакция агглютинации начинается через 15 секунд, явно выраженной становится через 1 минуту, но результат учитывают только спустя три минуты.

Если началась реакция агглютинации (склеивание эритроцитов и выпадение их в осадок), кровь маркируют резус-положительной, если слипания красных клеток не наблюдается, резус-фактор отрицательный. Склеенные эритроциты, которые представляют собой хлопья, видны невооруженным глазом.

Результат трактуется в зависимости от того, произошла ли агглютинация красных клеток

Экспресс-метод

В качестве реагента применяется сыворотка под названием «антирезус», которая является универсальной для всех групп крови.

  1. В пробирку помещают каплю крови (эритроцитов) в количестве 0,05 мл, затем добавляют 2 капли реагента «антирезус».
  2. Пробирку поворачивают, не встряхивая, чтобы содержимое перемешалось и равномерно растеклось по стеклу.
  3. Примерно через три-пять минут происходит склеивание эритроцитов.
  4. Чтобы исключить агрегацию красных клеток, в пробирку добавляют раствор изотонический NaCl в количестве 2-3 мл и несколько раз переворачивают пробирку, чтобы содержимое перемешалось.
  5. После этого считывают результат. Если появились хлопья на фоне более светлой жидкости, Rh положительный, если хлопьев нет, жидкость окрашена равномерно в розовый цвет, Rh – отрицательный.

Нужно сказать, что универсальные сыворотки могут дать ложноположительную реакцию с Rh-отрицательными эритроцитами.

Может произойти неспецифичное склеивание красных клеток, на поверхности которых есть другие антитела – не атирезус. Поэтому параллельно проводят тестирование с контрольным раствором усилителя.

Если после введения контрольного раствора происходит агглютинация, результат считается недостоверным, и тестирование повторяют с другим реагентом.

Пробирочный метод определения Rh

С применением желатина

Эта методика основана на применении желатина (в виде раствора 10 %). Для тестирования используются и стандартные антирезусные реагенты, и цоликлоны.

  1. В пробирку капают одну каплю крови (0,05 мл) или эритроцитов в виде взвеси в сыворотке (50 %).
  2. Затем 2 капли подогретого заранее до жидкого состояния раствора желатина.
  3. Далее 2 капли реагента, затем смешивают.
  4. Пробирку ставят на пять-десять минут на водяную баню (47°C) или на полчаса в сухой термостат с такой же температурой.
  5. Затем в пробирку добавляют физиологический раствор (5-8 мл), закрывают крышкой и осторожно поворачивают два-три раза, чтобы перемешать.
  6. Для определения наличия хлопьев содержимое пробирки осматривают невооруженным глазом на свет или через увеличительное стекло.

При использовании желатина не происходит неспецифической агглютинации. После проведения такой пробы необходимы контрольные тесты:

  • со стандартными Rh+ эритроцитами;
  • со стандартными Rh- эритроцитами;
  • с исследуемой кровью (эритроцитами) и желатином.

Заключение

Информация о резус-факторе необходима в случае переливания крови. Для гемотрансфузии может быть использована только совместимая по группе и по резусу кровь. Кроме этого, следует определить резус-фактор во время беременности. Еще лучше узнать его на этапе ее планирования. Это необходимо, чтобы предотвратить резус-конфликт между Rh-положительным плодом и Rh-отрицательной женщиной.

Источник: //icvtormet.ru/krov/kak-uznat-rezus-faktor

Группы крови. Определение группы крови и резус-фактора

Определение резуса фактора

Многочисленными исследованиями было показано, что в крови могут находиться различные белки (агглютиногены и агглютинины), комбинацией (наличием или отсутствием) которых и образуются четыре группы крови.

Каждой группе дано условное обозначение: 0 (I), А (II), В (III), AB(IV).
Установлено, что переливать можно только одногруппную кровь.

В исключительных случаях, когда нет одногрупповой крови, а переливание жизненно необходимо, допустимо переливание иногруппной крови.

В этих условиях кровь 0 (I) группы можно перелить боль­ным с любой группой крови, а больным, имеющим кровь AB(IV) группы, можно перелить донорскую кровь любой группы.

Поэто­му, прежде чем начинать переливание крови, необходимо точно установить группу крови больного и группу пере­ливаемой крови.

 

Определение группы крови.

Для определения группы крови пользуются стандарт­ными сыворотками групп 0 (I), А (II), В (III), которые спе­циально готовят в лабораториях станций переливания крови.
На белой тарелке на расстоянии3—4 см слева на­право ставят цифры I, II, III, обозначающие стандартные сыворотки.

Каплю стандартной сыворотки 0(I) группы наносят пипеткой в сектор тарелки, обозначенный циф­рой I; потом второй пипеткой наносят каплю сыворотки А (II) группы под цифрой II; так же берут сыворотку В(III) группы и третьей пипеткой-наносят под цифрой III.

Затем обследуемому укалывают палец и стеклянной палочкой переносят вытекающую кровь в каплю сыворот­ки, находящейся на тарелке, и смешивают до равномер­ного окрашивания. В каждую сыворотку крови переносят новой палочкой.

Через 5 мин с момента окрашивания (по часам!) по изменению в смеси определяют группу крови.

В той сыворотке, где произойдет агглютинация (склеивание эритроцитов), появляются хорошо видимые красные зернышки и глыбки; в сыворотке, где агглюти­нации не произойдет, капля крови останется гомогенной, равномерно окрашенной в розовый цвет.

В зависимости от группы крови обследуемого агглютинация произойдет в определенных пробах. Если обследуемый имеет 0 (I) группу крови, то склеивания эритроцитов ни с одной сы­вороткой не произойдет.

Если обследуемый имеет А (II) группу крови, то агглютинации не будет только с сыво­роткой группы А (II), а если обследуемый имеет В (III) группу, то агглютинации не будет с сывороткой В (III).

Агглютинация наблюдается со всеми сыворотками, если исследуемая кровь будет AB(IV) группы.
 

Иногда даже при переливании одногруппной крови наблюдаются тяжелые реакции. Проведенные исследования позволили установить, что приблизительно у 15% людей в крови отсутствует особый белок, так назы­ваемый резус-фактор.

Если этим лицам провести повтор­ное переливание крови, содержащей этот фактор, то воз­никнет тяжелое осложнение, называемое резус-конфлик­том, и разовьется шок. Поэтому в настоящее время всем больным обязательно проводят определение резус-фак­тора, так как реципиенту с отрицательным резус-фактором можно переливать только резус-отрицательную кровь.

Ускоренный способ определения ре­зус-принадлежности. На стеклянную чашку Петри наносят 5 капель антирезус-сыворотки той же груп­пы, что и у реципиента. В сыворотку добавляют каплю крови обследуемого и тщательно перемешивают. Чашку Петри помещают на водяную баню при температуре 42— 45°С.

Результаты реакции оценивают через 10 мин. Если наступила агглютинация крови, то у обследуемого кровь резус-положительная (Rh+); если агглютинации нет, то исследуемая кровь резус-отрицательная (Rh—).

Разработан ряд других способов определения резус-фактора, в частности с помощью универсального антирезусного реагента D.

Обязательно определение группы крови и резус-принадлежности всем больным, находящимся в стационаре. Результаты исследования должны быть зане­сены в паспорт больного.

Источник: //www.medglav.com/perelivanie-krovi/gruppy-krovi.html

ВашеЛечение
Добавить комментарий